产品货号：
KL220539
中文名称：
单细胞全基因组扩增试剂盒(荧光染料MDA法)
英文名称：
Single-Cell Real-Time SYBR MDA Whole Genome Amplification Kit
产品规格：
30T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品特点：
产品应用：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
用户自备：
超纯水，重悬细胞缓冲液
使用方法：
相关搜索：单细胞全基因组扩增试剂盒(荧光染料MDA法)，MDA扩增，WGA扩增，全基因组扩增，单细胞扩增
本制品是基于DNA环化技术和MDA技术、用于从单细胞（或数个细胞）中制备和扩增全基因组的试剂盒。
产品特点：
- 即开即用，不需要单独准备和优化所需试剂。
- 可以扩增单个细胞的基因组达上万倍。
- 具有全基因组扩增的所有特点，包括高产量和高保真性。
- 可使用各种来源的样品，包括培养细胞和胚胎细胞等。
- 本制品足够30次微量扩增。
- 本制品只能用于科研。
产品应用：
本试剂盒的扩增产物可用于多种后续试验，包括多重PCR、长片端PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析（片段差异，微卫星差异、SNP、STR）等。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| 单细胞裂解液(扩增专用) | 100μL |
| 单细胞MDA扩增溶液A | 30μL |
| MDA专用随机引物溶液 | 60μL |
| 20×饱和染料 | 30μL |
| 10×DNA环化-扩增缓冲液 | 50μL |
| dNTP(25mM) | 30μL |
| DNA环化酶A | 15μL |
| DNA环化酶B | 15μL |
| Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL) | 15μL |
保存：-20℃，有效期1年。
用户自备：
超纯水，重悬细胞缓冲液
使用方法：
- 如果有N个样本，则标记N+1个0.2mL的PCR管，在每个管中加入2.5μL单细胞裂解液（扩增专用）。多出的一个管标为无模板对照管。
- 将细胞悬浮在自备的PBS缓冲液或其他合适的缓冲液中，在显微镜下用毛细管转移单个细胞（或数个细胞，总体积不超过2.5μL）到上步准备的管中。在无模板对照管中不加入细胞，只加入2.5μL重悬细胞所用的缓冲液。
- 室温放置10分钟裂解细胞，所得裂解液为单细胞裂解液。
- 在上步的5μL单细胞裂解液中按下表加入各成分：
成分 N个样本管 无模板对照管 超纯水 4.5μL 4.5μL DNA环化酶A 0.5μL 0.5μL 在PCR仪器上37℃ 2小时，65℃ 20分钟，95℃ 5分钟，待温度下降到30℃左右加入。 10×DNA环化-扩增缓冲液 0.5μL 0.5μL 单细胞MDA溶液A 1μL 1μL DNA环化酶B 0.5μL 0.5μL 超纯水 3μL 3μL 在PCR仪器上65℃ 1小时，85℃ 10分钟后加入。 10×DNA环化-扩增缓冲液 0.5μL 0.5μL MDA专用随机引物溶液 2μL 2μL 20×饱和染料 1μL 1μL dNTP(25mM) 1μL 1μL 在PCR仪器上95℃ 5分钟，自然冷却到室温后加入。 phi29 DNA聚合酶(10U/μL) 0.5μL 0.5μL 合计 20μL 20μL - 30℃保温12小时。最好使用PCR仪进行30℃保温（注意：不是37℃）并打开热盖保温。每10分钟设置成一个循环，采集一次SYBR通道的荧光信号。由于是可以实时检测反应，所以反应不一定要在设置时间到达后结束，可以在扩增曲线进入平台期后（已经没有新的DNA合成）结束。
- 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性，所以最好将其灭活以免干扰后续反应。
- 典型实验结果。有扩增的样本将有平缓的S荧光曲线，无模板对照将没有此标准扩增曲线（见下图）或扩增曲线：
- 若采用30℃金属浴或水浴，必须在样品管中加入50μL石蜡油以防水分蒸发，使用电泳检测或PCR检测是否有扩增。
- 扩增所得DNA可以用于后续实验。
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