产品货号:
KL220539
中文名称:
单细胞全基因组扩增试剂盒(荧光染料MDA法)
英文名称:
Single-Cell Real-Time Whole Genome Amplification Kit
产品规格:
30T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是基于MDA技术的、用于从单细胞(或数个细胞)中制备和扩增全基因组的试剂盒。扩增产物可用于多种后续试验,包括多重PCR、长片端PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异,微卫星差异、SNP、STR)等。
- 即开即用,不需要单独准备和优化所需试剂。
- 可以扩增单个细胞的基因组达上万倍。
- 具有全基因组扩增的所有特点,包括高产量和高保真性。
- 可使用各种来源的样品,包括培养细胞和胚胎细胞等。
组分 | 规格 |
单细胞裂解液A | 100μL |
单细胞裂解液B | 100μL |
2×单细胞专用MDA MasterMix | 0.3mL |
Phi29 DNA聚合酶(10U/μL) | 15μL |
保存:-20℃,有效期1年。
- 将细胞悬浮在自备的PBS缓冲液或其他合适的缓冲液中,在显微镜下用毛细管转移单个细胞(或数个细胞,总体积不超过2.5μL)到含有2.5μL单细胞裂解液A的0.2mL PCR管中,室温放置2分钟。如果使用纯化好的来源于单细胞的DNA溶液,则直接将2.5μL的DNA溶液和2.5μL的单细胞裂解液A混合,室温放置2分钟。
- 加入5μL单细胞裂解液B,95℃保温5分钟,室温短暂离心半分钟。
- 然后冰上放置5~10分钟。
- 加入10μL 2×单细胞专用MDA MasterMix,轻柔吹打混合均匀。
- 加入0.5μL Phi29 DNA聚合酶(10U/μL),轻柔吹打混合均匀。
- 30℃保温12小时。最好使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴,必须在样品管中加入50μL石蜡油以防水分蒸发,因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁,从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高,WGA三小时即可检测到DNA扩增。
- 65℃加热10分钟使Phi29 DNA聚合酶灭活。
- 由于Phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性,所以最好将其灭活以免干扰后续反应。
- 立即取3~5μL反应液进行电泳检测扩增效果。
- 反应液中不含有甘油和电泳染料,所以需要先加上样缓冲液,电泳需要用核酸染料。
- 扩增的DNA可以用于后续试验或-20℃长期保存。
相关搜索:单细胞全基因组扩增试剂盒(荧光染料MDA法),MDA扩增,WGA扩增,全基因组扩增,单细胞扩增